在制作小鼠皮肤组织样品的时候,会发现皮肤组织韧性特别高。皮肤富含纤维组织和弹性,要从这类组织有效提取RNA是非常困难的,因此完全研磨这些组织是十分具有挑战性的。传统的人工或用手持式匀浆器来研磨不仅费时,研磨后的效果也不尽人意比较差,RNA产量低且令样本发热,那么使用组织研磨仪会有什么不同的效果呢?
大、小鼠皮肤组织提取DNA、RNA是目前各高校实验室的一项难题。温州医科大经过多个品牌试用比较后选择上海威九国际研磨仪来处理小鼠皮肤组织。本次实验对象为小鼠去毛后处理过的皮肤,要求磨细一点,提高RNA的浓度,涉及到RNA提取还需要低温研磨,因为有提取液,所以温度不能太低,否则冻住液体无法研磨,
实验步骤:
1、准备金属适配器一套,离心管和研磨珠若干。
2、预冷模块,把金属适配器放到液氮或冰箱中预冷(不用的时候顺手把模块放入-20冰箱,即可省去预冷步骤)
3、取适量小鼠皮肤组织、研磨珠、提取液一起放入离心管中,每管加三到五颗研磨珠,盖子盖上。
4、将完成预冷后的金属模块取出,放入研磨仪中固定(适配器底部与轴的卡槽互相卡牢)放平后将离心管分别放入适配器对应孔位,(注意平面配平,对称放样)盖上适配器盖,旋紧螺帽。
5、设置好参数(根据组织类型以及量微调),开始研磨。
6、磨好后打开仪器取出离心管,即可进行后续实验。
(皮肤组织装管图和研磨效果图)
上图为2-3分钟的研磨效果,已经完全研磨完成。之前所有样品都是人工处理,小鼠皮肤样特别难磨,磨出来效果很差,RNA提不出来,所以选用威九国际组织研磨仪代替人工处理。效率高,效果好,很好的解决了老师的问题。
注意事项:
1、按照组织的种类和量来选择研磨珠能达到好的效果,有不清楚的及时问上海威九国际销售人员。
2、往金属适配器里放离心管时注意平面配平,保证适配器压盖在水平线上。
实验选用仪器: 全自动样品快速研磨仪 JXFSTPRP-24
JXFSTPRP®系统与目前已有的其它样品制备方法相比,具有通用性广、高效灵活的优点。该系统避免了研磨、匀浆、超声波处理等传统方法的费力、耗时、低效等诸多缺点,可以高效、快速、稳定地裂解并纯化各种类型样品的核酸与蛋白。